在組織學(xué)染色技術(shù)中，蘇木精-伊紅（HE）染色法是應用很普遍的染色方法之一。蘇木精作為堿性染料，主要用于細胞核染色，而伊紅作為酸性染料，則用于細胞質(zhì)染色。在蘇木精染色完成后，為確保細胞核與細胞質(zhì)的清晰區分，分色處理成為關(guān)鍵步驟。本文將詳細解析蘇木精染色后常用的分色試劑及其操作方法。

　　分色試劑的選擇

　　蘇木精染色后，常用的分色試劑是1％鹽酸酒精溶液。鹽酸酒精通過(guò)破壞蘇木精的醌型結構，促使色素與組織解離，去除細胞核中結合過(guò)多的染料以及細胞質(zhì)中吸附的染料，從而確保伊紅染色時(shí)細胞質(zhì)能夠清晰著(zhù)色。鹽酸酒精的濃度和分色時(shí)間需根據具體實(shí)驗條件進(jìn)行精確控制，以避免分色過(guò)度或不足。

　　分色處理的操作步驟

　　染色后水洗：蘇木精染色完成后，首先需用自來(lái)水充分沖洗切片，去除多余的染料。

　　分色處理：將切片浸入1％鹽酸酒精溶液中，分色時(shí)間通常為數秒至數十秒，具體時(shí)間需根據染色效果在顯微鏡下進(jìn)行實(shí)時(shí)監控。分色過(guò)程中，應觀(guān)察細胞核與細胞質(zhì)的染色的情況，確保細胞核染色清晰而細胞質(zhì)基本無(wú)色。

　　水洗返藍：分色完成后，需用自來(lái)水或稀氨水（如0.5％氫氧化氨水溶液）充分沖洗切片，使細胞核返藍。返藍過(guò)程是必要的，因為鹽酸酒精分色后細胞核會(huì )呈現紅褐色，而返藍后則恢復為鮮明的藍色，便于后續觀(guān)察。

　　分色處理的注意事項

　　分色時(shí)間的控制：分色時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )導致細胞核染色過(guò)淺，甚至脫色；分色時(shí)間過(guò)短則無(wú)法有效去除細胞質(zhì)中的染料，影響伊紅染色效果。因此，分色時(shí)間需根據實(shí)驗條件進(jìn)行精確調整。

　　試劑的新鮮度：分色試劑的新鮮度對染色效果有明顯影響。使用新鮮的1％鹽酸酒精溶液進(jìn)行分色處理，可以獲得更好的染色效果。

　　顯微鏡監控：分色處理過(guò)程中，應在顯微鏡下實(shí)時(shí)監控染色效果，以便及時(shí)調整分色時(shí)間和其他參數。

　　后續處理：分色處理完成后，需進(jìn)行充分的水洗和返藍處理，然后進(jìn)行伊紅染色、脫水、透明和封片等后續步驟。

　　蘇木精染色后的分色處理是HE染色法中的關(guān)鍵步驟之一。通過(guò)選擇合適的分色試劑（如1％鹽酸酒精溶液）和精確控制分色時(shí)間及其他參數，可以確保細胞核與細胞質(zhì)的清晰區分，從而獲得高質(zhì)量的染色切片。在實(shí)際操作中，需嚴格遵守操作規程和注意事項，以確保染色效果的穩定性和可靠性。