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在病理學(xué)研究及臨床診斷中,組織固定是制作高質(zhì)量病理切片的首要步驟,而固定液的選擇與使用直接關(guān)系到組織形態(tài)結構的保存。但組織經(jīng)固定液固定后,并非能直接進(jìn)行切片,切片前的預處理步驟至關(guān)重要。
預處理對組織結構完整性的維護
組織固定雖能阻止細胞自溶與腐爛,維持細胞形態(tài),但固定過(guò)程可能使組織硬度增加、質(zhì)地變脆。以常用的福爾馬林固定液為例,它通過(guò)與組織中的蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)反應,使組織硬化。若不進(jìn)行預處理直接切片,組織容易在切片時(shí)碎裂,難以獲得完整、連續的切片。預處理中的脫水步驟,能逐步去除組織中的水分,使組織變得柔軟,增強其韌性,減少切片時(shí)的損傷,保證組織結構的完整性。
預處理對染色效果的優(yōu)化
染色是病理切片觀(guān)察的關(guān)鍵環(huán)節,準確的染色結果對于疾病的診斷和鑒別診斷至關(guān)重要。固定后的組織中仍殘留有固定液及其他雜質(zhì),這些物質(zhì)會(huì )干擾染料的滲透和結合,導致染色不均勻、背景著(zhù)色深等問(wèn)題。通過(guò)預處理中的透明步驟,利用二甲苯等透明劑將組織中的脫水劑置換出來(lái),使組織變得透明,為染料的進(jìn)入創(chuàng )造良好的條件。同時(shí),預處理還能調整組織的滲透性,使染料能夠更均勻地分布在組織中,提高染色的對比度和清晰度,便于病理醫生準確觀(guān)察組織的形態(tài)結構和細胞特征。
預處理對切片質(zhì)量的提升
高質(zhì)量的切片是病理診斷的基礎,而預處理是獲得高質(zhì)量切片的重要保障。在預處理過(guò)程中,通過(guò)一系列的化學(xué)和物理處理,能夠使組織達到適宜的硬度和韌性,便于在切片機上進(jìn)行操作。例如,經(jīng)過(guò)充分預處理的組織,在切片時(shí)能夠形成均勻、連續的蠟帶,減少切片過(guò)程中的褶皺、撕裂等現象,提高切片的完整性和平整度。此外,預處理還能去除組織中的氣泡和雜質(zhì),避免在切片和染色過(guò)程中產(chǎn)生偽影,確保切片的清晰度和真實(shí)性。
組織固定后的預處理通常包括脫水、透明、浸蠟等步驟。脫水一般采用梯度酒精進(jìn)行,逐步去除組織中的水分;透明則使用二甲苯等有機溶劑,使組織變得透明;浸蠟是將組織浸泡在熔化的石蠟中,使石蠟滲透到組織內部,為后續的切片做好準備。在進(jìn)行預處理時(shí),需要嚴格控制處理時(shí)間、溫度和試劑濃度等參數,避免過(guò)度處理或處理不足,以免影響組織的質(zhì)量和染色效果。因此,在實(shí)際操作中,應嚴格按照規范進(jìn)行預處理,確保病理切片的制作質(zhì)量。